استخراج DNA | Extraction of Genomic DNA :

ورود اعضا:

خبرنامه وب سایت:

NaCl 5 mol/l : برای این منظور مقدار 146.1 گرم از سود را در بالن ژوژه ای با اب مقطر حل کرده و به حجم 500 میلی لیتر می رسانیم .

Tris-HCl, 1 mol/l, pH 8: مقدار 60.5 گرم از Trizma base (tris[hydroxy]methylaminomethane) را در 350 میلی لیتر از اب مقطر حل می کنیم . سپس به محلول hcl اضافه می کنیم تا مقدار ph به 8.8 برسد . سپس حجم محلول را با افزودن اب به 500 میلی لیتر می رسانیم .

Tris-HCl, 1 mol/l, pH 7.4 : برای این منظور هم طبق بالا محلول را تهیه می کنیم ولی با افزودن hcl مقدار ph را به 7.4 می رسانیم .

NaOH, 5 mol/l : دویست گرم از NAOH را با 800 میلی لیتر اب مقطر حل می کنیم (دقت کنید که ! باید به خوبی حل کنیم . ) . سپس با اب مقعطر ان را به حجم یک لیتر می رسانیم .

EDTA, 0.5 mol/l, pH 8.0 : مقدار 93 گرم از EDTA دهیدارته دی سدیم را با 400 میلی لیتر از اب مقطر مخلوط می کنیم . باید دقت کنیم که تمام ماده حل شده باشد . سپس 0.5 mol/l NaOH را تا رسیدن به PH هشت در داخل محلول می ریزیم . سپس محلول را به حجم 500 میلی لیتر می رسانیم .

Phosphate buffered saline (PBS), pH 7.3

Nonidet P-40 (NP40), 10%. ده میلی لیتر از NP40 را با 90 میلی لیتر از اب مقعطر به خوبی مخلوط می کنیم .

Sodium dodecyl sulphate (SDS, lauryl sulphate), 20% : صد گرم SDS را با 350 میلی گرم اب به حجم می رسانیم . سپس در دمای 65 درجه حرارت می دهیم تا به خوبی حل شود سپس حجم را به 500 می رسانیم .
دقت کندی که SDS یک ترکیب محرکه تنفسی است و در زمان ازمایش باید از ماسک استفاده کرد و محلول را در زیر هود تهیه می کنیم .

PBS + 0.1% NP40 : مقدار 5 میلی لیتر از 10% NP40 را در 495 میلی لیتر از PBS حل می کنیم .

(Ten times concentrated (×10) lysis buffer): برای تهیه بافر لیز کننده ابتدا 60 ml of 5 mol/l NaCl, 20 ml of 0.5 mol/l EDTA, 10 ml of 1 mol/l Tris pH 7.4 و 10 میلی لیتر اب مقطر را با هم مخلوط می کنیم تا 100 ml of 3 mol/l NaCl, 100 mmol/l EDTA, و 100 mmol/l Tris به دست اید .

Lysis solution : این محلول را باید همان روز مورد مصرف قرار داد . 7 mol/l از اوره را با 5 میلی لیتر از بافر بالایی مخلوط می کنیم سپس حجم را به 50 میلی لیتر می رسانیم .

Chloroform/isoamyl alcohol (24:1): مقدار 20 میلی لیتر از isoamyl alcohol را به 480 میلی لیتر از کلروفروم اضافه می کنیم .

Ethanol 70% : برای تهیه این محلول هم (همان طور که دوستان بهتر از ما اطلاع دارند!) 30 میلی لیتر از اب مقطر را به 70 میلی لیتر الکل مطلق اضافه می کنیم .

Tris EDTA (TE) (10 mmol/l Tris, 1 mmol/l EDTA). : مقدار 5 ml of 1 mol/l Tris pH 7.4را با 1 ml of 0.5 mol/l Na2 EDTA مخلوط می کنیم سپس به حجم 494 می رسانیم .

TE equilibrated phenol : میزان فنول برای به دست اوردن DNA بسیار مهم است . DNA در ترکیب اسیدی فنول محلول است پس لازم است تا PH ان به PH طبیعی نزدیک باشد . برای تهیه آن از روش زیر باید استفاده کنیم :

Take 500 ml of water-saturated phenol. Prepare 500 ml of 0.5 mol/l Tris pH 8.5, add 150 ml of this to the phenol, and mix by inversion for 2–3 min. Leave to stand until the aqueous and organic phases have separated.

Remove and discard the upper aqueous layer. Add another 125 ml of 0.5 mol/l Tris, mix, stand, remove the aqueous layer as before, and then repeat.

To the remaining 100 ml of 0.5 mol/l Tris, add 400 ml of water to give 500 ml of 0.1 mol/l Tris. Add 150 ml of this to the phenol, and then mix, stand, and remove. Repeat two more times.

To the remaining 50 ml of 0.1 mol/l Tris add 449 ml of water and 1 ml of 0.5 mol/l EDTA to give 500 ml of TE. Add, mix, stand, and remove this in three stages as before. The phenol will have reduced in volume during this procedure but is now TE equilibrated and ready for use.

محتاجم: به رویشی نه از این خاک به زایشی نه از این دست به باوری نه چنین پست به تقدیری نه چنین تلخ..... ضمن خوش آمد گويي به تمامي عزيزاني كه به اين وبلاگ مراجعه نموده اند؛ بنده محمدحسین از زنجان دانشجوی رشته علوم آزمایشگاهی دامپزشکی و عضو انجمن مخترعین و نخبگان کشور می باشم .در مورد اين وبلاگ بيشتر سعي شده است که جدیدترین مطالب و مقالات مربوط به این رشته قرار گيرد تا از هر لحاظ مورد استفاده بازديدكنندگان محترم قرار بگيرد. در ضمن با توجه به اينكه به روز شدن اين وبلاگ سريع انجام مي پذيرد؛ از شما خواهش مي كنيم از آرشيو نيز ديدن فرماييد. نكته ي پاياني اينكه با توجه به اينكه بيشتر مقالات علمي و مطالب ديگر ،نوشته ي مدير وبلاگ مي باشد، خواهشمند است در صورت استفاده از اين مطالب ضمن كسب اجازه از مدير وبلاگ ، منبع آن را ذكر كنيد. هم اکنون منتظر نظرات و مطالب جدید شما دوستان عزیز می باشیم...